فروش دستگاه HPLC
کروماتوگرافی مایع یا HPLC که نشان اختصاری High-Performance Liquid Chromatography می باشد ، بوسیله یک گیاهشناس روسی به نام تسوت، در اوایل قرن بیستم (۱۹۰۳) کشف شد در واقع دستگاهی است برای جداسازی، شناسائی و مقدار سنجی اجزای یک ترکیب.
اساس کار دستگاه کروماتوگرافی مایع
بدون شک مهمترین و پرکاربردترین روش جداسازی، روش “کروماتوگرافی” است.کروماتوگرافی از دو بخش کروماتو به معنای رنگ و گرافی به معنای ترسیم می باشد و نشانگر متد قدیمی تفکیک مواد بر اساس رنگ می باشد. در واقع دستگاهی است برای جداسازی، شناسائی و مقدار سنجی اجزای یک ترکیب، که با استفاده از حلال ها با فشار بسیار بالا استفاده شود.
بخش های مهم دستگاه کروماتوگرافی مایع
مخازن حلال
در مخازن حلال فاز متحرک و یا حلالهای شستشودهنده ستون ریخته شده است
پمپ
به منظور انتقال حلال و همچنین نمونه در فضای ستون، نیاز به ایجاد فشاری در سیستم است که برای ایجاد آن حداقل از یک پمپ استفاده میشود. حلال (فاز متحرک) توسط پمپ با سرعت و جریان ثابتی بر روی فاز ساکن حرکت داده میشود. فشار سیستم به اندازه (سایز) ذرات موجود در ستون، گرانروی (Viscosity) و سرعت جریان فاز متحرک بستگی دارد. بسته به نوع جداسازی، میزان سرعت جریان فاز متحرک تعیین میگردد.
در مواردی که با تعددی از آنالیتها مواجه هستیم، هر گونه جدا شده، خود را به صورت یک پیک در کروماتوگرام نهایی نشان میدهد. در سرعت جریان کمتر فاز متحرک، فاصله بین پیکها افزایش یافته و جداسازی بهتری خواهیم داشت.
تزریقکننده (Injector)
تزریق نمونه، بسته به نوع دستگاه، به دو شکل دستی و یا خودکار انجام میگیرد. در روش خودکار، نمونه در ظروف مخصوصی ریخته شده و در محل تعبیه شده در دستگاه قرار میگیرد. پس از اینکه اپراتور دستور تزریق را (از طریق نرمافزار) میدهد، نمونه توسط یک سرنگ به سیستم منتقل میشود.
در روش دستی، از سرنگهایی با ظرفیتهای مختلف برای تزریق نمونه استفاده میشود. حجم نمونه تزریق شده (در هر دو روش)، به حجم حلقه نمونهبردار (Loop) بستگی دارد.
آشکارساز (Detector)
الف- از پرکاربردترین انواع آشکارساز، طیفسنج UV-Vis است که برای اجسامی که در این ناحیه جذب داشته باشند مورد استفاده قرار میگیرد. در این آشکارساز با استفاده از تفاوت میزان جذب نمونه با منبع نوری اولیه و در نهایت با استفاده از قانون بیر لامبرت، غلظت نمونه اندازهگیری میشود.
در مواردی که از این آشکارساز استفاده میشود انتخاب طول موج مناسب یکی از مواردی است که میبایست مد نظر قرار بگیرد. در طول موج انتخابی، نباید مزاحمهای موجود در نمونه و همچنین حلال جذب داشته باشند.
ب- (RID) ضریب شکست: اساس کار این آشکارساز بر مبنای تغییراتی است که در ضریب شکست سیستم حلال به تنهایی و سیستم حلال همراه با نمونه، ایجاد میشود. پاسخ این آشکارساز به حرارت وابسته بوده و به همین دلیل معمولا به ندرت ازآن استفاده میشود.
ج- (FLD) فلورسانس، حساستر از آشکارساز UV/Vis است ولی ترکیبات کمی موجودند که خاصیت فلورسانس داشته باشند؛ درنتیجه کاربرد این آشکارساز نیز محدود است.
د- الکتروشیمیایی، که عملکرد آن برپایه واکنشهای اکسید و احیا میباشد و شامل روشهای آمپرومتری (Amperometry)، پلاروگرافی (Polarography)، کلونسنجی (Coulometry) و هدایتسنجی (Conductometry) است.
ه- (MS) طیفسنج جرمی : این مورد امروزه به دلیل مزایای زیادی که دارد به طور وسیعی مورد استفاده قرار میگیرد. از این جمله میتوان به حد تشخیص (LOD) بسیار پایین، حساسیت و انتخابگری (Selectivity) بالا، و امکان بررسی نمونه در حضور مزاحمهای شیمیایی اشاره کرد.
هنگام فروش دستگاه HPLC همکاران ما راهنمایی های لازم را انجام می دهند.
به عنوان فاز متحرک، مخلوطی از حلالها در ازای یک حلال خالص میتواند بهکار گرفته شود. نسبت اجزاء فاز متحرک در طی یک تزریق ممکن است ثابت باشد که در این صورت به آن روش ایزوکراتیک (Isocratic) گفته میشود. در حالتی دیگر که به آن روش گرادیانت (Gradient) گفته میشود.
طی یک تزریق و با پیشرفت زمان، طبق برنامهای که از قبل برای سیستم تعریف شده است، درصد متفاوتی از دو یا چند حلال مخلوط شده و در سیستم توسط پمپ جریان مییابد.
ستون
پس از تزریق، نمونه ابتدا وارد قسمتی به نام پیشستون (pre-column) یا ستون محافظ (Guard column) میشود. نقش این ستون، محافظت از ستون اصلی است. طول این ستون معمولا در حد سانتیمتر است و جنس آن از فولاد زنگ نزن است. ماده پرکننده (Packing) ستون محافظ از جنسی مشابه ماده پرکننده ستون اصلی است.
هم جنس بودن نوع پرکننده این مزیت را دارد که اگر مادهای که با ذرات ستون وارد واکنش شود در نمونه موجود باشد، در ابتدا در ستون محافظ به دام افتاده وستون اصلی را دچار آسیب نمیکند. طول ستونهای اصلی دستگاه معمولا حدود ۳۰-۱۰ سانتیمتر بوده و درون ستون را با موادی که به یکی از دو فرم پوستهدار و یا متخلخل است، پر کردهاند.
سایز این مواد پرکننده که بر کیفیت جداسازی تاثیر فراوانی دارد، متفاوت بوده و معمولا در حد ۳ تا ۵ میکرومتر است.
مشخصات ستون
ستون میتواند قطبی و یا غیرقطبی باشد. از مرسومترین ستونهای غیرقطبی میتوان به C18، اکتادسیل سیلان (ODS) اشاره کرد. جنس ستونها از فولاد ضدزنگ (Stainless Steel) است. پس از ورود نمونه به ستون، براساس تفاوت قطبیت، اجزاء مختلف نمونه در زمانهای متفاوتی با نام زمان بازداری (Retention Time) از یکدیگر جدا شده و برای تشخیص نوع ماده به سمت آشکارساز(Detector) هدایت میشوند.
در نهایت پس از اتمام کار باید ستون را شستشو دهیم. برای شستشو، بسته به نوع ستون، حلال متفاوتی را با ترتیب خاص انتخاب میکنیم. برای مثال در ستونهای غیرقطبی پس از اتمام کار، ابتدا ستون را با یک حلال قطبی (معمولا آب) و سپس با یک حلال غیرقطبی (معمولا متانول) شستشو میدهند.
شرکت درخشان طب سعادت علاوه بر فروش دستگاه HPLC ، ستون های موررد نظر شما را نیز تامین می کند.
